蛋白质组学网-开放实验室

     由O’Farrel等1975年建立的双向电泳技术是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术，一般能分离1000 – 3000个蛋白质点，最好的胶能分离得到11000个左右的蛋白质点。

     第一向进行等电聚焦（isoelectric focusing ,IEF）,由于蛋白质具有两性解离和等电点特性，将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，会向与其所带电荷相反的电极方向移动。移动过程中，蛋白分子可能获得或失去质子，并随着移动的进行，该蛋白所带的电荷数和迁移速度下降。当蛋白迁移至其等电点pH位置时，其净电荷数为零，在电场中不再移动。当蛋白扩散到低于其等电点pH区域时，带正电荷，在电场的影响下重新向阴极移动。同样，如果蛋白质扩散到高于其等电点的pH区域时，则带负电，在电场的作用下会向阳极移动。根据各自不同的等电点，蛋白质最终被聚焦在一个很窄的pH梯度介质区域内。目前常使用预制胶条（IPG）用于蛋白质的等电聚焦分离，将聚焦好的IPG胶条在含有SDS的缓冲液中平衡。

     第二向是将在IPG胶条中经过第一向分离的蛋白质转移到SDS-PAGE凝胶上，根据蛋白质的相对质量或分子量（MW）大小与第一向相垂直的分离。沿垂直的方向进行SDS-PAGE电泳，按分子量大小进行分离。样品经过电荷和质量两次分离后，得到等电点和分子量的信息。

     第一向

(1) BIO-RAD公司PROTEAN IEF Cell等电聚焦仪：采用珀耳帖温度控制聚焦平台；最大电压为10, 000伏；有不同的电压上升方式；可分步进行时间或电压·小时控制；重泡胀可采取整体的或独立的步骤；程序可时时控制；可同时聚焦24根7cm，12根17cm胶条；有三个预设程序的方法；有十个用户自定方法；采集运行数据可经RS232端口输出或任何热敏打印纸。

(2) Amersham pharmcia Biotech公司IPGphor等电聚焦仪：电极区域为铜镀金板；最多上12个样品；平台温度为18-25℃±1℃；胶条槽（Holder）体为氧化铝陶瓷，丙烯酸的盖子；适合7、11、13和18cm的胶条；程序参数包括重泡胀时间、平台温度、每根胶条的最大限流、每步的电压、每步的电流改变模式、每步的时间；可编辑10个程序，每个程序分有九个步骤；电压输出最大为8000V；最大电流为1.5mA；最大功率为12W。

     第二向

(3) BIO-RAD公司PROTEAN II xi Cell电泳槽：电极是直径为0.01英寸的白金电极；适用于16.5×20cm 凝胶电泳；凝胶厚度为1.0mm；可同时运行1-2块胶;上槽缓冲溶液350ml, 下槽缓冲溶液1.2 L;典型SDS-PAGE电泳时间：无冷却时为5小时，带冷却时为3.5小时。配套电源为Power Pac 1000：在进行电泳时，最大电压不超过1000V，最大功率不超过80W，最大室温不超过50℃。

(4) Amersham pharmcia Biotech公司Ettan DALT II System：①此系统的电源控制为Power Supply/Control Unit:最大输出功率是200W；温度控制范围是10-50℃最大电压600V；最大电流1A。②使用Gel caster灌胶模具：最多可同时灌25.5×20.5cm 、1mm厚的梯度胶或均一胶14块。

(5) Amersham pharmcia Biotech公司Hoefet miniVE electrophoresis and electrotransfer Unit：胶大小为10.0×8cm ;最多可同时跑两块胶；跑一块胶时需1.7L电极缓冲液，跑两块胶时需1.2L电极缓冲液；最大电压是600V，最大功率是25W；所配置电源为Electrophoresis Power Supply EPS 301.

(6) 图像分析软件为Amersham pharmcia Biotech公司imageMasterTM 2D version:5.0

     BIO-RAD公司自动蛋白点切胶仪（ProteomeWorksTM spot cutter）：是一套自动切胶系统，能够自动切取在PDQuesTM图像分析软件的操控下，直接切取凝胶中的蛋白质点。

Micromass MassPREP workstation 酶解工作站：

     可自动进行脱色、还原、烷基化和自动酶解。优点：可调节的温度控制，用于优化蛋白的还原、烷基化和降解；对试剂和降解肽段进行板上冷却的能力，保证了降解结果的重复性。

     本开放实验室建立、完善了蛋白质组学技术平台及“十大技术体系”。到目前为止，全国有近400个单位/课题组到蛋白质组平台上工作，包括许多著名大学和研究所等，课题来源包括973课题、863课题、国家自然科学基金、地方科学基金以及开发与生产等。蛋白质组学平台获得863评委们的肯定。

     愿意与我们协作者，请下载“协议书”：
     http://www.proteomics.com.cn/2005/msl/price/XieYiShu.doc

     合作领域：
     http://www.proteomics.com.cn/2005/ketixiezuo.asp

     在研的部分课题如下

1. 863项目“蛋白质技术平台的建立及其在肿瘤泛素通路中的应用”
2. 国家自然科学基金项目“异烟肼和利福平联合使用肝毒性增加的代谢组学、基因组学、蛋白质组学研究”
3. 国家科技攻关计划项目人类重大疾病及重要生理功能相关的蛋白质组学研究）“蛋白质定位技术平台建立与应用”。
4. 国家自然科学基金项目“胎儿酒精综合征发生机制的基础研究”。

1. Xia Q, Wang HX, Wang J, Zhang JY, Liu BY, Li AL, Lv M, Hu MR, Yv M, Feng JN, Yang SC, Zhang XM, Shen BF. Proteomic analysis of interleukin 6-induced differentiation in mouse myeloid leukemia cells. International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 2005 (in press)
2. Cui JW, Wang J, He K, Jin BF, Wang HX , Li W, Kang LH, Hu MR, Li HY, Yu M, Shen BF, Wang GJ, Zhang XM. Proteomics analysis of human acute leukemia cells: insight into their classifications. Clinical Cancer Research, 2004 Oct 15; 10(20):6887-96.
3. Cui JW, Wang J, He K, Jin BF, Wang HX , Li W, Kang LH, Hu MR, Li HY, Yu M, Shen BF, Wang GJ, Zhang XM. Two-dimensional electrophoresis protein profiling as an analytical tool for human acute leukemia classification. Electrophoresis，2004 Dec 29;26(1):268-279.
4. Jin BF, He K, Wang HX, Wang J, Zhou T, Lan Y, Hu MR, Wei KH, Yang SC, Shen BF, Zhang XM. Proteomic analysis of ubiquitin-proteasome effects: insight into the function of eukaryotic initiation factor 5A. Oncogene，2003 22:4819-4830.

1. 填写 双向电泳申请书：
   
   http://www.proteomics.com.cn/2005/msl/price/2D_app.doc
   发信给：wkh@proteomics.com.cn, 我们会及时修正、回复您的申请的。
   
   
2. 填写在线申请书：
   
   http://www.proteomics.com.cn/2005/userdata/user_online.asp
   

1. 样品可为冻干粉、溶液或胶内蛋白质（必须为考染），冻干粉、溶液应无盐。样品如有毒性或腐蚀性或需特殊保存的样品，请事先声明。
2. 填写样品申请单应完整，包括样品名称、性质、数量；送样人姓名、单位、联系电话、单位地址，课题名称等所有样品申请单的各项内容。
3. 网上填写样品申请单：http://www.proteomics.com.cn/2005/userdata/user_online.asp